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Aiguë supplémentation L-Arginine ne pas augmenter la production d'oxyde nitrique chez des sujets sains reçu 20 Décembre 2011 Accepté: 16 mai 2012 Date de publication: 12 Juin 2012 Résumé des suppléments alimentaires contenant de la L-arginine ont été commerTadalafilés dans le but d'augmenter la vasodilatation, et donc, le sang et l'apport d'oxygène au muscle exercice. La présente étude a évalué l'effet aigu de la L-arginine supplémentation sur les indicateurs de la production de NO, le nitrite (NO 2 -) nitrate (NO 3 -) (NOx), chez des sujets sains. Les concentrations plasmatiques de dimethylarginine asymétrique (ADMA) et diméthylarginine symétrique (SDMA) ont également été abordées. Dix-sept hommes en bonne santé ont participé à un, en double aveugle, étude randomisée contrôlée contre placebo. Des échantillons de sang ont été prélevés dans une veine du coude gauche au départ (T0). Ensuite, les sujets étaient submittedto au hasard 6 g de supplémentation orale L-arginine (sous forme de chlorhydrate de L-arginine) ou un placebo (comme l'amidon de maïs) après, les sujets sont restés au repos dans la position et des échantillons de sang décubitus ont été établis à nouveau à 30 (T1), 60 (T2), 90 (T3) et 120 minutes (T4) après la supplémentation. Pour analyser la production de NO, NO 3 - a été converti en NO 2 - par la nitrate réductase, suivie par la dérivation de NO 2 - avec le 2,3-diaminonaphtalène. NOx, ADMA et SDMA ont été analysés en utilisant un système de chromatographie en phase liquide à haute performance et surveillés avec un détecteur de fluorescence. Deux voies ANOVA avec des mesures répétées a montré aucun changement significatif dans les concentrations de NOx sur le groupe L-arginine par rapport au groupe placebo à l'un des points fivetime (T0: 17,6 3,9 vs 14,6 2,3 mol / L T1: 15,8 2,4 vs 14,3 1,7 mol / L T2: 16,8 4,9 vs 13,7 2,7 mol / L T3: 16,7 3,9 vs 14,6 2,1 mol / L, T4: 15,1 2,8 vs 13,5 3,5 mol / L). En outre, les taux plasmatiques de ADMA et SDMA ne sont pas statistiquement significative entre les groupes L-arginine et placebo à T0 (0,43 0,19 vs 0,39 0,15 mol / L et 1,83 1,13 vs 1,70 0,62 mol / L), respectivement. En conclusion, aiguë L-arginine supplémentation ne pas augmenter la concentration plasmatique de NOx chez les individus en bonne santé avec des concentrations plasmatiques normales de ADMA. Mots-clés Acides aminés Nitric oxyde dimethylarginine Asymétrique Symétrique dimethylarginine Nitrite Nitrate CLHP Introduction De nombreux suppléments ont été introduits sur le marché dans le but d'améliorer les athlètes de performance 1. La plupart de ces suppléments prétendument aider les athlètes tolèrent un degré plus élevé de la formation lourde en aidant les athlètes à récupérer plus rapidement pendant intense entraînement sportif 2. Récemment, des suppléments contenant de la L-arginine ont été introduites sur le marché qui prétend promouvoir la vasodilatation en augmentant l'oxyde nitrique (NO) par l'intermédiaire de l'oxyde nitrique synthase (NOS) activation. Cette vasodilatation favoriserait une augmentation de la perfusion, ainsi qu'une substance nutritive plus élevée et de l'oxygène livraison aux muscles actifs pendant l'exercice, l'amélioration de la synthèse des protéines et la récupération musculaire 2. La L-arginine est considérée comme un acide aminé semi-essentiel parce que le corps produit normalement en quantités suffisantes. Cependant, la supplémentation peut être nécessaire dans des conditions particulières telles que la malnutrition, la production excessive d'ammoniaque, des brûlures, des infections, une dialyse péritonéale, une croissance rapide, les troubles de synthèse d'urée, et / ou d'une septicémie 3. Les concentrations physiologiques de la L-arginine chez les individus en bonne santé sont suffisantes pour saturer NOS endothéliale, qui est 3 mol / L. Par conséquent, complémentaire L-arginine ne devrait pas promouvoir une activité accrue de l'enzyme par conséquent, aucune autre production de NO devrait se produire. Cependant, il existe des preuves décrivant les effets biologiques NO médiées associés à la L-arginine supplémentation en dépit du fait que l'oxyde nitrique synthase (NOS) est théoriquement saturée avec la concentration physiologique de la L-argininehence la condition connue sous le nom de L-arginine paradoxe 4. Les premières données suggèrent que la L-arginine supplémentation peut aider à traiter les personnes présentant des facteurs de risque de l'athérosclérose, tels que l'hypercholestérolémie, l'hypertension, le diabète sucré, l'insuffisance rénale, l'hyperhomocystéinémie, le tabagisme, et agingall qui sont des conditions qui sont associées à une réduction de NO biosynthèse 5 9. Bger R. 10 a montré que les concentrations plasmatiques de dimethylarginine asymétrique (ADMA), un inhibiteur de NOS endogène, sont augmentés d'environ 23 fois dans les conditions physiopathologiques associés aux maladies cardiovasculaires. Pour cette raison, la concentration ADMA élevée peut être une explication possible pour la dysfonction endothéliale et une diminution de la synthèse de NO dans ce groupe de maladies. Par conséquent, il semble que seuls les sujets avec une mauvaise synthèse de NO sont susceptibles de bénéficier de la L-arginine supplémentation. En dépit de la théorie sur la L-arginine supplémentation en améliorant la vasodilatation de l'augmentation de la production de NO, une étude récente 2 à propos de l'effet ergogénique de L-arginine supplémentation chez des sujets sains montre qu'il n'y avait que cinq études qui ont évalué la performance de l'exercice après aiguë L-arginine supplémentation, trois de qui a rapporté des améliorations significatives. Outre les améliorations observées dans la performance physique, les auteurs de ces études ne mesurent pas le mécanisme sous-jacent qui pourrait expliquer comment les résultats obtenus peuvent avoir été due à une augmentation de la production de NO. Bailey et al. 11 ont observé des augmentations significatives dans le temps de l'échec de tâche avec des réductions concomitantes du coût O2 d'intensité modérée exercice de cycle et lente absorption d'oxygène composante d'amplitude sur le groupe supplémenté avec 6 g de L-arginine, 1 h avant une série de modérée et sévère intensité des épisodes d'exercice pour les 3 jours. Stevens et al. 12 observé augmentation significative du pic de couple, travail total et l'indice de fatigue après complétant avec un produit contenant 6 g de L-arginine en trois aliquotes égales à 45, 30 et 10 min périodes avant isocinétique exercice de dynamomètre. Buford et Koch, 13 ont observé une amélioration significative de la puissance moyenne pendant ensembles répétés d'exercice supra-maximal pendant ergomètre de cycle sur le groupe qui a consommé 6 g de L-arginine. Basé sur la théorie que les concentrations physiologiques de L-arginine sont suffisantes pour saturer NOS endothéliale et aucune autre production de NO devraient survenir chez des personnes en bonne santé, il est notre hypothèse qu'il n'y ait pas de concentration changement inplasma de NO 2 - et NO 3 - en tant que résultat de la L-arginine supplementation par rapport au placebo. En raison du fait que d'autres études ont démontré vasculaire et avantages de performance d'exercice après la L-arginine supplémentation chez des individus sains 2. 14, la question demeure de savoir si cet effet est NO médiée. Par conséquent, afin de tester l'affirmation selon laquelle la L-arginine supplémentation peut augmenter la synthèse de NO, la présente étude a été menée pour identifier les effets aigus de la L-arginine supplémentation sur les marqueurs indirects de NO synthesisNO 2 - et NO 3 -. Il est à souligner que, contrairement à la présente étude, d'autres studiesthat a évalué l'effet de la L-arginine supplémentation sur la synthèse de NO au reste des limites méthodologiques 15 (par exemple, ils ne contrôlent pas le régime alimentaire des aliments contiennent NO 2 - et NO 3 -) , ce qui peut entraîner des défauts dans les résultats. Les taux plasmatiques de ADMA et SDMA au début de l'étude ont également été abordées. Méthodes Sujets Dix-sept hommes en bonne santé (25,5 3,5 ans, 78,7 10,5 kg 176,1 7,5 cm et 25,3 2,3 kg. m -2 IMC) ont été recrutés pour participer à l'étude. Tous les sujets ont été pleinement informés de la nature et le but de l'enquête et ont donné leur consentement écrit à participer. Les critères d'exclusion pour la participation à l'étude étaient tout cardiovasculaire connue, pulmonaire ou les maladies métaboliques (asthme, le diabète, l'hypertension, la dyslipidémie, etc.), et l'utilisation de ergogenics nutritionnelles et pharmacologiques. Toutes les procédures expérimentales ont été effectuées en conformité avec les normes éthiques de la Déclaration d'Helsinki et ont été approuvés par le Comité institutionnel d'éthique de l'hôpital Universitrio Clementino Fraga Filho (protocole 0118.0.197.000-10) de Rio de Janeiro, Brésil. La conception expérimentale Dans une étude en double aveugle et randomisée contrôlée contre placebo, les sujets rapporté au laboratoire. Des échantillons de sang ont été prélevés à partir d'un avant-bras veine du coude au départ après une période de dix minutes de repos au calme en position couchée. Ensuite, les sujets ont été répartis au hasard en un placebo ou un groupe L-arginine et reposé de nouveau en position couchée dans une pièce calme. Des échantillons de sang ont été prélevés à nouveau à 30 (T0), 60 (T1), 90 (T2) et 120 minutes (T4) après la supplémentation (voir Figure 1). Pendant cette période, les sujets ont consommé aucune nourriture et des boissons. Résumé de la conception expérimentale. contrôle alimentaire Un jour avant de procéder à l'étude, les sujets ont été orientés à la NO 2 - et NO 3 - le contenu des aliments et ont été invités à restreindre leur alimentation des aliments riches en NO 2 - et NO 3 -. Une liste décrivant les aliments et groupes d'aliments à éviter et à privilégier a été distribué aux sujets, afin de simplifier leurs choix alimentaires pour une faible NO 2 - et NO 3 - aliments pour la période de 24 heures avant l'étude. En bref, les sujets ont été invités à éviter les produits végétaux, comme les épinards et le squash, qui contiennent les plus grandes quantités de NO 3 - par portion. Bonbons, noix, graisses et huiles contiennent très peu de NO 3 - par portion et ont donc été autorisés. La viande rouge (bœuf, porc, agneau, le mouton et le foie) et de haricots produits contiennent les plus grandes quantités de NO alimentaires 2 - par portion et devaient être évités. sources négligeables de NO 2 - alimentaire se trouvent dans le fromage cottage, les matières grasses comme le beurre ou la margarine, et divers jus de fruits. Cette orientation alimentaire a été basé sur une liste établie à des estimations de NO alimentaires 2 - et NO 3 - 16 ans. L'adhésion au régime a été contrôlé par le rappel de vingt-quatre heures menée à l'arrivée pour l'étude, dans laquelle chaque sujet a été interrogé quant à leur apport alimentaire pour la période de 24 heures avant la date d'arrivée pour l'étude. Une analyse plus poussée de la consommation d'énergie et de macronutriments (en pourcentage de l'énergie totale) à partir du rappel de vingt-quatre heures de chaque sujet des deux groupes L-arginine et le placebo a été réalisée en utilisant un logiciel d'analyse de la nutrition (dietWin Professional 2008 pour les fenêtres, version 2.0, Porto Alegre, RS, Brésil). Supplémentation Dix minutes après l'échantillon de sang de base, tous les sujets ont été administrés par voie orale, soit 6 g de chlorhydrate encapsulé L-arginine ou un placebo (comme l'amidon de maïs) dans des formes identiques avec 400 ml de H 2 O Milli-Q en double-aveugle et randomisée . Nous avons choisi de fournir 6 g de L-arginine, car une telle dose serait bien toléré lorsqu'il est consommé par voie orale, et a été signalé pour augmenter la vasodilatation 17. la production d'oxyde nitrique Le sang a été prélevé à partir des veines du coude et recueilli dans des tubes contenant de l'EDTA, puis immédiatement centrifugée à 3000 g pendant 10 min à 4 ° C pour séparer le plasma, avant de la stocker à 80 ° C pour une analyse ultérieure. La production de NO a été dosée en mesurant le plasma NO 2 - NO 3 - (NOx) comme précédemment décrit par Li et al. 18. En bref, le plasma a été dilué dans une proportion de 1:10 et 1: 100 dans le but d'analyser NO 2 - et NO 3 -. respectivement. Après dilution, 1 ml de chaque échantillon ont été filtrés à l'aide d'un ultrafiltre de coupure 10 kDa (Vivaspin 2, GE Healthcare) à 14000 g pendant 15 min pour éliminer les protéines de haut poids moléculaire. NO 3 - a été converti en NO 2 - enzymatiquement par la nitrate réductase EC 1.6.6.2 (Roche Diagnostics, Mannheim, Allemagne) à partir de l'espèce Aspergillus. La solution, qui est composée de 200 litres de l'échantillon, 120 NADPH et M 2 M DCP a été mis en incubation à température ambiante pendant 1 h. Suite à la conversion de NO 3 - NO 2 -. l'échantillon a été mis en incubation à 24 ° C avec 316 mM de 2,3-diaminonaphtalène à convertir le NO 2 - dans le 2,3-naphtotriazole fortement fluorescent suivi par l'addition de NaOH 2,8 et analysé immédiatement par chromatographie liquide à haute performance (HPLC). Le dispositif de HPLC a été équipé d'un 5 m en phase inverse C8 colonne Discovery (150 x 4,6 mm, ID) gardé par un 40 m en phase inverse C18 colonne de garde Ascentis (50 x 4,6 mm, ID) et un modèle de détecteur de fluorescence RF 10AXL (Shimadzu) le contrôle des longueurs d'onde d'excitation et d'émission à 375 nm et 415 nm, respectivement. Les deux colonnes ont été obtenues à partir de Supelco (Bellefonte, PA, USA). La phase mobile (1,0 mL / min) a été de 15 mM de tampon de phosphate de sodium (pH 7,5) et du méthanol. Oxydation de NO par l'intermédiaire de plusieurs réactions métaboliques dans les résultats de la formation de nitrites (NO 2 -) et de nitrate (NO 3 -), comme les deux principaux produits finaux 19. Le produit d'oxydation principal de la synthèse de NO dans des solutions aqueuses (en l'absence de constituants biologiques tels que les hémoprotéines) est NO 2 -. La poursuite de l'oxydation en NO 3 - nécessite la présence d'espèces oxydantes additionnelles telles que 20 oxyhemoproteins. Par exemple, le NO est rapidement oxydé en NO 2 - par l'intermédiaire d'une auto-oxydation dans des solutions aqueuses, tels que des fluides biologiques et peut réagir avec des anions superoxydes pour produire peroxynitrites. En présence de groupes hème dans les protéines telles que l'hémoglobine et la myoglobine, ne réagit avec l'oxyhémoglobine pour produire metahemoglobin et NO 3 -. Par conséquent, la mesure de NO 2 - et NO 3 - dans divers fluides biologiques avéré être la méthode non invasive la plus appropriée, pratique et fiable pour évaluer la synthèse de NO systémique in vivo 19. Plasmatiques d'acides aminés Les acides aminés L-arginine, la L-citrulline et la L-ornithine ont été analysés comme précédemment décrit par Wu et 21 Meininger. En bref, 50 litres de plasma a été mélangé avec 50 litres d'acide perchlorique 1,5 M (v / v) pour éliminer les protéines. Au bout de 2 minutes à la température ambiante, 1,125 ml H 2 O et 25 L de carbonate de potassium ont été ajoutés. Les tubes ont été centrifugés à 10 000 g pendant 2 min. L'échantillon (25 L) a été mélangé avec 25 L de l'o-phtaldialdéhyde (OPA) Solution de réactif (v / v) pendant 1 min. La solution a été transformé en dérivé immédiatement analysé par HPLC. Le dispositif de HPLC a été équipé d'un 3-m en phase inverse C18 colonne Kromasil (150 x 4,6 mm ID) gardé par un 40 m en phase inverse précolonne C18 Ascentis (50 x 4,6 mm ID) et un détecteur de fluorescence modèle RF-10AXL (Shimadzu) de surveillance d'excitation et d'émission des longueurs d'onde à 340 nm et 455 nm, respectivement. Ces méthodes chromatographiques sont très sensibles, spécifiques et précis, ainsi que de fournir un outil utile pour étudier la voie L-arginineNO. ADMA et SDMA analyse Les concentrations plasmatiques de ADMA et de SDMA ont été analysés comme précédemment décrit par Wu et 21 Meininger. En bref, 200 litres de plasma a été mélangé avec 100 L d'acide perchlorique 1,5 M (v / v) pour éliminer les protéines, suivie par 50 litres de 2 M de carbonate de potassium et 700 L de tampon phosphate (pH 7,0). L'ensemble de la solution a été chargée dans une colonne d'extraction en phase solide (Oasis MCX) et on a éliminé le solvant d'élution à l'aide d'un système échantillon de concentrateur (Savant SpeedVac Concentrateur, Thermo Fisher Scientific Inc.). Les résidus ont été mis en suspension dans 200 L H 2 O. L'échantillon (15 L) a été mélangé avec 15 L du réactif OPA (v / v) pendant 1 min. La solution a été transformé en dérivé immédiatement analysé par HPLC. Le dispositif de HPLC a été équipé d'une 1.005 colonne Nucleosil C6H5 (250 x 4,6 mm I. D Manchery Nagel, Easton, PA) et un modèle de détecteur de fluorescence RF 10AXL (Shimadzu) contrôlé excitation et d'émission des longueurs d'onde à 340 nm et 455 nm, respectivement. Toutes les procédures chromatographiques ont été réalisées à température ambiante. L'analyse statistique A deux voies ANOVA avec des mesures répétées sur deux facteurs (2 x 5 x groupe temps) a été utilisé pour identifier les différences de NOx et acides aminés plasmatiques à chaque point de temps. Calcul de la zone de concentration de NOx du plasma intégrée sous la courbe (ASC) a été déterminée par l'utilisation d'une méthode trapézoïdale (ligne de base de concentration de NO x: y 0). Non apparié de Student - test a été utilisé pour identifier les différences dans les concentrations plasmatiques de l'ADMA, SDMA et L-arginine rapport / ADMA au début de l'étude. La signification statistique a été fixé au niveau de confiance de 0,05. Toutes les analyses ont été effectuées en utilisant GraphPad Prism version 5.00 pour Windows (GraphPad Software, San Diego California USA). Résultats caractéristiques Sujet Au début de l'étude, il y avait pas de différence significative entre le placebo assignés au hasard par rapport à des groupes de L-arginine par rapport à l'âge, la taille, le poids corporel, l'IMC, la graisse corporelle (voir le tableau 1). Sujets caractéristiques initiales Les valeurs sont l'écart type moyen. L-Arg L-arginine groupe supplémenté groupe Pla Placebo. contrôle alimentaire Basé sur l'évaluation du rappel de vingt-quatre heures, tous les sujets des groupes à la fois la L-arginine et placebo avait apparemment adhéré à l'orientation alimentaires et éviter tous les aliments énumérés plus haut en NO 2 - et NO 3 -. Il n'y avait pas de différence significative de la consommation d'énergie et le pourcentage de macronutriments avant 24 h de commencer l'étude entre les groupes L-arginine et placebo (2663 508,5 vs 2905 641,6 kcal 52,9 6,3 vs 53,6 5,8 glucides 21,6 4,8 vs 21,7 5,1 protéines 25,5 7,9 vs 24,7 6,4 graisse). la production d'oxyde nitrique Plasma NO 2 - NO 3 - (NOx) des concentrations à chaque point de temps sont représentés sur la figure 2. Aucune différence significative n'a été observée entre les groupes à tout point de temps. La figure 3 présente les données pour le total intégré NOx AUC au cours de la période post-supplémentation 120 min. L'ASC intégrée a révélé que malgré une 15 plus élevée, la supplémentation en L-arginine n'a pas donné lieu à une plus grande réponse de NOx que le placebo dans le temps (P 0,05). les concentrations de NOx Plasma (mol / L). Aucun changement significatif n'a été observé entre les groupes à tout point de temps. L-Arg L-arginine groupe supplémenté groupe Pla Placebo. Surface totale de NOx intégrée sous la courbe pendant la période post-supplémentation 120 min. Aucun changement significatif n'a été observé entre les groupes au fil du temps. L-Arg L-arginine groupe supplémenté groupe Pla Placebo. Acides aminés plasmatiques Les concentrations plasmatiques de L-arginine, la L-citrulline et la L-ornithine à chaque point de temps sont représentées dans le tableau 2. Aucune différence significative entre les groupes n'a été observée au niveau de référence. Plasmatiques de L-arginine a augmenté de manière significative à 30 min (39,1 vs 209,9 123,3 44,6 mol / L, P 0,01) après la supplémentation dans le groupe L-arginine, par rapport au groupe placebo (voir la figure 4). Aucun changement significatif n'a été observé entre les groupes dans le plasma L-citrulline et L-ornithine à tout point de temps. Les valeurs de plasma acides aminés (mol / L) à 10, 30, 60, 90 et 120 minutes post-supplémentation Les valeurs sont l'écart type moyen. Les symboles (P Pla Placebo groupe. Concentration plasmatique de L-arginine. Les symboles (P Pla Placebo groupe. ADMA Plasma et SDMA Au début de l'étude, il n'y avait pas de différences significatives dans les taux plasmatiques de ADMA, SDMA et L-arginine rapport / ADMA entre le placebo assignés au hasard par rapport à des groupes de l-arginine (0,43 0,19 vs 0,39 0,15 mol / l et 1,83 1,13 vs 1,70 0,62 mol / l) (voir le tableau 1). suppléments Discussion alimentaires contenant l'acide aminé semi-essentiel L - arginine (le seul substrat de NOS) ont été introduites sur le marché, qui prétend promouvoir la vasodilatation en augmentant la production de NO. dans la présente étude, nous avons constaté que chez les sujets sains 6 g de supplémentation orale l-arginine n'a pas stimulé une augmentation la production de NO par rapport au groupe placebo. en outre, aucune augmentation significative n'a été observée dans le plasma de l-citrulline, qui est le sous-produit de la synthèse de NO à partir de l-arginine. de plus, aucune différence significative entre les concentrations plasmatiques de ADMA et de SDMA au début de l'étude ont été observées entre les groupes l-arginine et placebo. Plusieurs études ont montré aucune différence significative dans la production de NO (mesurée par NO 2 - et NO 3 -) après L-arginine 22 24 supplémentation. Liu et al. 22 n'a pas observé de différences significatives dans le plasma NO 2 - et NO 3 - concentrations après complétant oralement dix athlètes masculins en bonne santé avec 6 g de L-arginine (comme forme libre) ou un placebo pendant 3 jours. Koppo et al. 23 observé aucune différence significative dans urinaire NO 2 - et NO 3 - après 14 jours de compléter sept hommes sains et actifs physiquement avec 7,2 g de chlorhydrate de L-arginine (3 3 gélules de 805 mg), et Tang et al. 24 n'a pas non plus observé de différence significative sur la synthèse de NO (mesurée par plasma NO 2 - et NO 3 -) dans huit jeunes hommes en bonne santé après une seule dose de 10 g de L-arginine. Étant donné que tous les sujets de ces études ont été présentées à l'exercice, les résultats de ces études ne sont pas surprenants en raison de la nature même du mécanisme sous-jacent de la synthèse de NO: contrainte de cisaillement vasculaire est considéré comme le principal stimulus de NO endothélial de production pendant l'exercice 25. Par conséquent, il ne devrait théoriquement pas besoin de complément L-arginine pour synthétiser NO pendant l'exercice. En ce qui concerne les études à l'état de repos, Blum et al. 26 étudié les effets de la L-arginine par voie orale (9 g par jour pendant un mois) sur la bioactivité du NO dans les 10 femmes post-ménopausées en bonne santé. Après la période de supplémentation, les auteurs ont observé aucune différence significative dans le sérum NO 2 - et NO 3 - concentrations. Dans une autre étude, Evans et al. 27 n'a également trouvé des différences significatives dans le sérum NO 2 - et NO 3 - concentrations après le dépôt de douze sujets sains à prendre L-arginine pour des périodes de 1 semaine à des doses quotidiennes de 3, 9, 21 et 30 g. Schwedhelm et al. 28 a publié une étude dans le but d'enquêter sur les pharmacocinétiques et pharmacodynamiques de propriétés orale L-arginine à l'égard de NO métabolisme. Vingt sujets sains ont été soumis à deux doses de L-arginine supplémentation (1 g d'arginine fois d'arbres à libération prolongée par jour ou 1,6 g de la libération immédiate arginine deux fois par jour) pendant 7 jours. Au niveau de référence et le jour 7, une dose unique de L-arginine, la supplémentation (la moitié de la dose journalière totale, respectivement) a été administré et des échantillons de sang ont été prélevés à 0, 0,5, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 , 16 et 24 h après la supplémentation. Les auteurs ont observé aucune différence significative dans l'excrétion urinaire de nitrate à tout point de temps, en dépit de l'augmentation des concentrations de L-arginine plasmatique après la supplémentation (T max 3,7 1,3 h pour l'arginine à libération prolongée et de 0,7 à 0,1 h pour l'arginine à libération immédiate). Dans la présente étude, les concentrations plasmatiques de L-arginine a augmenté de façon significative après 30 min de la L-arginine supplémentation par rapport au groupe placebo, et maintenu élevé pendant toute la période d'étude. Par ailleurs, aucune différence significative n'a été observée dans les concentrations plasmatiques de L-ornithine et L-citrulline en tout point de temps entre les groupes. Il est important de souligner que, contrairement à la présente étude, aucune des études mentionnées ci-dessus sous contrôle la consommation d'aliments riches en NO 2 - et NO 3 - des sujets alimentation avant ou pendant l'étude. La plupart NO 2 - et NO 3 - provient de l'alimentation (produits végétaux contiennent les plus hauts niveaux de NO 3 - viande et de haricots produits contiennent les plus hauts niveaux de NO 2 -), ce qui peut modifier les résultats de l'analyse. Ainsi, la synthèse endogène de NO ne peut pas être mesuré de manière adéquate par NO 2 - et NO 3 - dans le plasma et l'urine si le régime est pas contrôlé. Mesure de NO 2 - et NO 3 - dans divers fluides biologiques avéré être la méthode non invasive la plus appropriée, pratique et fiable pour évaluer la synthèse de NO systémique in vivo 19. Dans la présente étude, la synthèse de NO a été quantifié en mesurant le plasma NO 2 - NO 3 - (NOx) par l'intermédiaire d'une chromatographie liquide à haute performance. La plupart des études 22 24 avaient analysé la synthèse de NO en utilisant la réaction de Griess. Les conditions acides sous lesquelles des expériences en utilisant la réaction de Griess sont conduites favorisent la formation de composés S-nitroso de NO 2 - et les thiols réduits. Ainsi, la mesure de NO 2 - et NO 3 - dans les fluides biologiques par des analyses sur la base du Griess est soumise à une interférence par de nombreuses substances agissant à différents endroits dans la réaction de Griess et la mesure de spectrophotométrie suivant la même longueur d'onde (absorption normale à 540 nm). Par conséquent, les études utilisant la réaction de Griess pour détecter les métabolites stables (NO 2 - et NO 3 -) pour mesurer la synthèse de NO peut avoir des limites méthodologiques importantes, par rapport aux techniques fluorométriques associés à HPLC. Bailey et al. 11 a observé des augmentations significatives dans le plasma NO 2 - après complétant neuf hommes sains et actifs récréationnellement avec un supplément qui contient 6 g de L-arginine (dissous dans 500 ml d'eau) par rapport au placebo. Il est important de noter que cette étude associée à d'autres acides aminés en dehors de la L-arginine, y compris la L-citrulline (quantités non exprimées dans l'étude), ce qui a été montré pour augmenter la production de NO, telle que mesurée par les concentrations plasmatiques de NO 2-29 et L'excrétion urinaire de NO 3 - et le GMPc 28. Fait intéressant, les auteurs ne mesurent pas le plasma NO 2 - au départ, ils avaient juste fait 1 heure après la supplémentation, ce qui est une limitation méthodologique majeur, car il ne sait pas s'il y avait des différences dans les échantillons avant la supplémentation. En outre, en prenant en considération que le régime alimentaire peut influencer les concentrations plasmatiques de nitrite, aucun contrôle alimentaire pour limiter la consommation d'aliments riches en NO 2 - et NO 3 - a été menée. D'autres études ont également montré des améliorations dans la production de NO en utilisant la L-arginine supplementation 30 33. Cependant, toutes ces études avaient administré L-arginine chez les sujets présentant des facteurs de risque cardiovasculaire ou cardiopathie. Il apparaît que la L-arginine est un facteur limitant pour la synthèse de NO chez les patients à risque pour l'athérosclérose, mais pas pour les individus en bonne santé 34. Par conséquent, L-arginine supplémentation peut être nécessaire que pour les personnes ayant des facteurs de risque de l'athérosclérose. Parmi les explications possibles de ce phénomène est la présence de niveaux élevés de dimethylarginine asymétrique (ADMA), un inhibiteur de NOS endogène. Des concentrations plus élevées de l'ADMA ont été rencontrées chez des individus atteints d'athérosclérose, ainsi que chez les individus présentant des facteurs de risque d'athérosclérose, tels que l'hypercholestérolémie, l'hypertension, le diabète, l'insuffisance rénale, l'hyperhomocystéinémie, le tabagisme et le vieillissement 10. des niveaux physiologiques de la L-arginine et la présence d'une concentration normale de l'ADMA se saturent l'enzyme NOS endothéliale, la promotion de la production de NO. Dans ces conditions, la L-arginine supplémentation n'a aucune incidence sur l'activité enzymatique. En revanche, en présence de concentrations plasmatiques élevées de l'ADMA l'activité de la NOS endothéliale diminue, ce qui entraîne des niveaux physiologiques inférieurs de la production de NO. SDMA n'a aucun effet sur l'activité de NOS, mais peut rivaliser avec la L-arginine pour le système de transport y 35. Dans ces conditions, la L-arginine supplémentation peut rétablir la L-arginine rapport / ADMA pour activer NOS endothéliale 4. Par conséquent, L-arginine supplémentation peut exercer un effet bénéfique sur la fonction vasculaire. Dans la présente étude, nous avons observé aucune différence significative dans les concentrations plasmatiques de l'ADMA, SDMA et L-arginine rapport / ADMA au départ entre les groupes. Cette constatation peut expliquer l'absence de changements significatifs dans la production de NO après L-arginine supplémentation. Les concentrations plasmatiques de base de ADMA observée dans la présente étude sont semblables à des études antérieures chez des sujets sains qui ont rapporté des concentrations ADMA comprises entre 0,3 et 0,9 mol / L 36 38. Par conséquent, il peut être émis l'hypothèse qu'il n'y ait pas d'augmentation supplémentaire de la production de NO après la supplémentation de L-arginine chez les sujets ayant des niveaux normaux d'ADMA. Bger et al. 34 observé que les niveaux de l'ADMA plasmatique étaient significativement plus élevés chez les sujets hypercholestérolémiques que chez les sujets normocholestérolémiques de contrôle (2,17 0,15 et 1,03 0,09 mol / L, respectivement) et les niveaux supérieurs de l'ADMA a été associée à une réduction de la synthèse de NO. Par conséquent, il semble que les concentrations de ADMA plasmatiques élevées peuvent inhiber l'enzyme NOS, mais de faibles concentrations normales ou ADMA plasmatique n'affectent la synthèse de NO. En conclusion, la L-arginine supplémentation ne pas augmenter la production de NO chez des sujets sains ayant des concentrations en ADMA plasmatique normale. Par conséquent, il est déconseillé de recommander des suppléments alimentaires contenant de la L-arginine aux fins de la production de NO increasingacutely chez des sujets sains. Ce résultat ne rejette pas l'effet possible de la L-arginine sur la production de NO dans les individus avec pathophysiologicalconditions (par exemple, l'hypercholestérolémie, l'hypertension, le diabète sucré, l'insuffisance rénale, l'hyperhomocystéinémie, le tabagisme et le vieillissement) et des études à long terme sont nécessaires pour déterminer si la L-arginine peut offrir certains avantages. Les abréviations oxyde nitrique synthase Intérêts concurrents Chaque auteur certifie qu'il ou elle n'a pas d'associations commerciales (bureaux d'études, banque de propriété, les intérêts de l'équité, les arrangements de brevet / d'octroi de licences, etc.) qui pourraient poser un conflit d'intérêts dans le cadre de l'article soumis, à l'exception comme décrit sur une pièce jointe. Toutes les sources de financement qui soutiennent le travail et toutes les affiliations institutionnelles ou des sociétés des auteurs sont reconnus dans une note dans le travail. Auteurs contributions TSA ont largement contribué à l'acquisition de données et l'analyse chromatographique, l'analyse statistique et l'interprétation des données, et a été l'auteur du manuscrit. CACJ a largement contribué à l'analyse chromatographique, l'interprétation des résultats, et la révision du manuscrit. JTS a contribué à l'interprétation des données et la révision du manuscrit. VMFP a contribué à l'interprétation des données et la révision du manuscrit. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final. Auteurs Affiliations Laboratoire d'analyse avancée en biochimie et biologie moléculaire, Département de biochimie, Institut de Chimie, Université fédérale de Rio de Janeiro Laboratrio de Anlises Avanadas em Bioqumica e Biologia Molecular, Departamento de Bioqumica Instituto de Qumica, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Avenida Athos da Silveira Ramos Références Kreider RB, Wilborn CD, Taylor L, Campbell B, Almada AL, Collins R, Cooke M, Earnest CP, Greenwood M, Kalman DS, Kerksick CM, Kleiner SM, Leutholtz B, Lopez H, Lowery LM, Mendel R, Smith A, Spano M, Wildman R, Willoughby DS, Ziegenfuss TN, Antonio J: Recommandations ISSN exercice. J Int Soc Sport Nutr. 2010, 7: 7 à 10,1186 / 1550-2783-7-7. Voir l'article Alvares TS, Meirelles CM, Bhambhani YN, Paschoalin VM, Gomes PS: L-arginine comme une aide potentielle Ergogenic chez des sujets sains. Sport Med. 2011, 41 (3): 233-248. 10,2165 / 11538590-000000000-00000. 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